高压灭菌121～125 °C保持3～4 h，常压灭菌100～105 °C保持12～16 h。自然冷却后，将整个灭菌网袋装车，立即运送至羊肚菌栽培大田，在1～2天内将全部营养料袋打孔或切口后孔口、切口紧贴菌床摆放在菌床上，不得长期存放。